宫颈腺癌组织中人乳头瘤病毒感染型别分布的研究

　　[摘要]目的 高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）感染是宫颈癌发生发展的主要致癌病因。文中旨在研究以江苏省为主的区域性女性多种类型宫颈腺癌组织中HPV感染型别分布状况及其临床意义。方法 收集来自江苏省、安徽省以及山东省在内的17家医院202例女性宫颈腺癌组织标本，对其进行临床病理学分类诊断，从各类宫颈腺癌组织中抽提其HPVDNA,使用基因芯片结合聚合酶链式反应的方法对所有宫颈腺癌组织检测其23种HPV;并以10岁为极差，对受检者HPV感染型别分布状况进行分析。结果 202例宫颈腺癌组织标本中检出HPV阳性者131例（64.85%）。单一型别感染率为40.59%（82/202），其中最主要的感染型别HPV16型为19.80%（40/202），HPV18型为17.33%;多型感染率为24.26%（49/202），包括HPV16+18型11例，占多型感染的22.45%（11/49），HPV16+58型、HPV16+18+31+33+52型和HPV16+18+31+33+58型各3例，均为6.12%（3/49）。结论 单一16和18型以及多型16+18型、HPV16+58型、HPV16+18+31+33+52型和HPV16+18+31+33+58型是导致以江苏省为主的区域性女性宫颈腺癌组织的主要基因型，应引起疾病预防以及临床诊治的足够重视。
　　
　　[关键词]宫颈腺癌；人乳头瘤病毒；基因分型；基因芯片技术
　　
　　0引言
　　
　　宫颈癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一。全世界近85%的宫颈癌发生在发展中国家。2011年，全球宫颈癌新发病例52.9万，死亡27.5万。中国每年新发宫颈癌病例13.5万，占全球新发病例的1/4以上，死亡约5万人[1-4].宫颈癌以鳞癌最为多见，宫颈腺癌则占第2位。宫颈腺癌发病率尽管明显少于宫颈鳞癌，但近年来发病率不断升高。有数据显示，宫颈腺癌在宫颈癌中的占比已从20世纪50年代的5%上升至90年代的10%~22%,且年轻患者的数量明显增加[1,5-6].HPV感染同样会导致宫颈腺上皮病变。宫颈脱落细胞学检查对宫颈腺性病变的筛查不如鳞状上皮病变有效，这是宫颈腺癌绝对与相对数量增加的重要因素[7-8].为进一步明确高危HPV型别在以江苏省为主的区域性女性宫颈腺癌人群中的分布状况，不同类型的宫颈腺癌组织中HPV感染的比例以及HPV16和18型感染在不同年龄段女性中所占的比例，本研究对202例多种宫颈腺癌的HPV感染情况以及患者的临床病理资料进行分析，现报道如下。
　　
　　1资料与方法
　　
　　1.1研究对象 收集2001年9月至2015年12月期间江苏省镇江市丹徒区人民医院、扬中市人民医院、常熟市第一人民医院、南京市六合区人民医院、南京市大厂医院、镇江市第一人民医院、盐城市第一人民医院、无锡市锡山人民医院、靖江市人民医院、南京市中医院、徐州市中医院、常熟市中医院、射阳县人民医院、上海梅山医院；安徽省安庆市第一人民医院、当涂县人民医院以及山东省临沂市肿瘤医院病理科病理组织学诊断的各种类型宫颈腺癌202例，患者年龄为21~82岁，平均年龄（51.6±11.2）岁。其中20~29岁3人、30~39岁19人、40~49岁76人、50~59岁60人、60~69岁29人、70~79岁9人、80~89岁6人。所有组织切片资料均由5年以上主治医师按照WHO组织学妇科肿瘤的分类标准（2014年版）进行复片，并复习其临床病理资料。
　　
　　1. 2仪器与试剂 AB Applied Biosystems2720型基因扩增仪购自（新加坡Perkin Elmer公司）；Combi-H12型杂交仪购自（韩国Fineper公司）；Eppendorf5810R型高速冷冻离心机产自（德国Eppendorf公司）；BSC2A2购自（上海瑞抑净化装备公司）；HPV分型基因检测试剂盒购自（亚能生物技术深圳公司）。
　　
　　1.3方法
　　
　　1.3.1DNA的提取 将1.5mL存有宫颈腺癌组织切片的离心管取出后吸裂解液150μL,将加有裂解液的离心管放置振荡器上混匀振荡。待裂解液与待测组织充分混匀后，将待测管置于100℃的金属浴中约10min,温浴后以13000r/min离心10min,离心半径7cm.离心后吸出待测管中间层的DNA溶液备用。以上的试验操作依据说明书规范进行。每份检测标本显色后，依据膜芯片上各位点杂交信号判断结果。
　　
　　1.3.2宫颈腺癌类型及年龄分组 以病理诊断不同类型的宫颈腺癌进行分组，除宫颈浆液性腺癌、宫颈黏液腺癌的宫颈内膜型及印戒细胞型以及宫颈中肾腺癌4组因样本较少被排除外，对其他4种不同类型宫颈腺癌组进行对比研究。以10岁为极差行组间比较研究。
　　
　　1.4统计学分析 使用SPSS19.0统计软件对试验结果行统计学分析。定性资料以n（%）形式表示。各组间率的比较采用χ²检验。以P≤0.05为差异有统计学意义。
　　
　　2结果
　　
　　202例宫颈腺癌组织中，HPV23种基因分型检测出HPV阳性者131例，占64.85%.其中单一型别HPV感染者82例（40.59%）；多型HPV感染者49例（24.26%）。单一型别感染中，最主要的感染类别为HPV16型40例，（19.80%）；HPV18型为35例（17.33%）。多型HPV感染49例，其中HPV16+18型11例是多型感染的优势型别（22.45%），HPV16+58型、HPV16+18+31+33+52型和HPV16+18+31+33+58型各为3例（6.12%）。
　　
　　202例宫颈腺癌组织中，宫颈普通型腺癌162例（80.20%），肿瘤由大小不等的腺体组成，腺体既有宫内膜样分化又有黏液样分化，癌细胞呈柱状，细胞核位于基底，多层，排列拥挤，极向紊乱，异型性明显，核分裂象可见，部分细胞胞质内含黏液；宫颈透明细胞腺癌15例（7.43%），肿瘤由透明细胞组成，细胞排列成实性结构，细胞核位于细胞中央，细胞胞质透亮（胞质含有丰富的糖原），可见核分裂象，见图1;宫颈内膜样腺癌11例（5.45%），肿瘤排列成大小不一的腺腔，可见小乳头状结构，腺上皮细胞复层，细胞核垂直于基底膜呈栅栏状排列，见图2;宫颈绒毛腺管状腺癌7例（3.47%），肿瘤由纤维轴心的乳头组成，乳头长短、粗细不一，可见细长乳头，也可见粗而短的乳头，乳头表面被覆单层或复层柱状上皮细胞，细胞分化较好，细胞核长形深染，核分裂象少见，见图3;宫颈浆液性腺癌3例（1.49%）、宫颈黏液腺癌宫颈内膜型2例（0.99%）、宫颈黏液腺癌印戒细胞型1例（0.50%）、宫颈中肾腺癌1例。
　　 　　 　　 　　
　　各年龄组患者HPV感染阳性率比较的差异无统计学意义（P>0.05）。见表1.
　　 　　
　　3讨论
　　
　　宫颈浸润性腺癌是指宫颈腺上皮发生的浸润性癌。宫颈腺性病变的癌前期病变诊断较困难，早期病变不易发现，加之宫颈鳞状上皮病变的早期筛查及诊治的有效性，导致浸润性宫颈鳞癌的发病比例有所下降，而宫颈腺癌的比例有所上升[9-10].同期的宫颈腺癌较同期宫颈鳞癌预后更差，故早期发现、早期诊断、早期治疗非常关键。由于宫颈腺癌的发病也与高危型HPV感染有关。因此，明确我国大样本宫颈腺癌组织中高致癌性的HPV型别及其感染状态对宫颈腺癌的防治有着重大意义。
　　
　　本文结果表明，宫颈腺癌组织中HPV总阳性率为64.85%,低于吴斌等[8]报道的77.50%.其中单一型别阳性率为40.59%,多型阳性率为24.26%,提示宫颈腺癌患者中以单一型别HPV感染为主。本研究发现，单一型别与多型之比为1∶0.6,推测与文献差异造成的原因在于地域、标本的种类、数量以及检测方法不同，值得今后进一步研究和探讨[11].应用不同的HPV检测方法，40%~80%的宫颈腺上皮病变均可检测出HPVDNA,包括宫颈原位腺癌、微浸润性腺癌、浸润性腺癌以及腺鳞癌[1,7,11].本研究应用聚合酶链式反应联合基因膜芯片杂交法检测浸润性宫颈腺癌组织中23种HPV感染型别，其阳性检出率为64.85%.与世界范围内的38个国家宫颈腺癌HPV感染率（65.72%）较为接近，说明不同的检测方法、标本类型、本数量、采集地域对于宫颈腺癌的HPV感染率存在着一定差异性[12].宫颈浸润性腺癌的平均发病年龄为44~54岁，这一数据与宫颈鳞癌无明显差别。但近年来，宫颈癌腺的发病年龄有年轻化的趋势，小于35岁的患者比例有明显增加[13].本研究发病率最高的为40~49岁年龄组，患病人数76例，占总人数的37.62%;其次为50~59岁年龄组，患病人数60例（29.7%）；而44~54岁年龄组患病人数74例，占总人数的36.63%.
　　本研究发病高峰为40~49岁年龄组与宫颈浸润性腺癌的平均发病年龄44~54岁比较，提示其宫颈浸润性腺癌发病年龄有所提前。HPV16和18型也是与宫颈腺癌密切相关的2种最常见型别，但18型与宫颈腺癌的关系比宫颈鳞癌更为密切[1,7].
　　
　　总之，目前认为宫颈腺癌起源于宫颈管柱状上皮内具有多种分化潜能的储备细胞，且宫颈原位腺癌是宫颈浸润性腺癌的直接癌前病变。宫颈腺癌发生发展的许多流行病学风险因素与宫颈鳞癌相似。流行病学研究发现，宫颈腺癌和鳞癌相同，其发病原因都与HPV感染有关。高危16和18型是宫颈腺癌和鳞癌最常见的感染类型[1,14-15].然而与宫颈鳞癌相比，高危18型更常见于宫颈腺癌组织中。现阶段，应明显提升和改变宫颈腺癌的治疗效果，增加其生存率，首要任务是早发现、早诊断、早治疗。由于目前没有任何一种检测技术能够完全检出宫颈腺癌，其诊断应采用组合模式，即采用宫颈管HPV分型检测联合颈管细胞DNA倍体检测和颈管细胞检查，以及阴道镜检查加上宫颈管搔刮或活组织病理检查[16].需改进宫颈腺癌的取样，采用合理的筛查手段，规范诊断标准，使得临床病理科医师能够尽早诊断出宫颈腺癌，从而实现早诊断、早治疗[17-18].现阶段，我国宫颈腺癌的发病率低于西方国家。开展宫颈腺癌HPV感染的大样本研究应联合多家医院参与，这样才能逐步建立起我国自己的宫颈腺癌HPV感染分型数据库，并对我国宫颈腺癌防治和疫苗的研发具有重要的指导意义。
　　
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