摘要：目的观察我院不同类型的临床送检标本中常见的非发酵革兰阴性杆菌的分离情况，并对常用抗菌药物耐药特征进行分析和总结。方法分别采用MicroScanautoSCAN4全自动细菌鉴定系统和K-B纸片扩散法来鉴定细菌种类和进行药物敏感试验。结果323株非重复株中，包含假单胞菌139株、不动杆菌137株、嗜麦芽假单胞菌16株、伯克霍尔德菌属14株、金色杆菌属10株、无色杆菌属7株。结论非发酵杆菌也是造成我院患者感染的一种病原菌，且没有特异性的临床表现，因此医院不仅要做好细菌耐药特点及趋势的分析工作，也要做好抗生素的应用指导和监管工作。
关键词：非发酵革兰阴性杆菌；抗生素；耐药性
近几年，临床上抗生素的大量应用及侵入性治疗使得患者出现感染的风险大大增加，并且开始出现越来越多的耐药株，且多重耐药现象频发。非发酵菌已经发展成为医院患者发生感染的一种常见致病菌。我院在最近两年的常规检测中分离出多种并不常见的非发酵菌，例如不动杆菌属、伯克霍尔德菌属、金色杆菌属，现将具体情况报道如下。
1材料与方法
1.1菌种来源
2013年11月至2015年11月我院细菌室分离出323株革兰阴性非发酵菌，并由卫生部临床检验中心提供了铜绿假单胞菌ATCC2785、大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923三种质控菌株。
1.2仪器及培养基
MicroScanautoSCAN4鉴定系统由美国德灵生产；Mueller-Hinfen琼脂购于英国OX-OID公司，血琼脂购于广州迪景生物有限公司。
1.3抗生素纸片
抗生素纸片为兰州麦迪微生物科技有限公司提供的由英国OXOID公司生产的15种抗菌药物纸片，包括头孢他啶（CAZ）、妥布霉素（TOB）、头孢吡肟（FEP）、复方新诺明（SXT）、美洛培南（MEM）、左旋氧氟沙星（LEV）、阿米卡星（AK）、庆大霉素（CN）、氨曲南（ATM）、亚胺培南（IMP）、哌拉西林（PRL）、替卡西林（TIC）、米诺环素（MH）、头孢哌酮/舒巴坦（SCF）和哌拉西林/他唑巴坦（TZP）。
1.4试验方法
首先按照常规方法对细菌进行分离培养以分离得到单个细菌种群，然后借助法国API20NE条或MicroScanau原toSCAN4鉴定系统对细菌种类进行鉴别。遵循NCCLS制定的标准，采用K-B纸片扩散法进行细菌的药敏试验。
2结果
2.1细菌来源和分类
本次实验从5例中心静脉导管、6例血液、32例胆汁、34例尿液、244例痰标本中分离出323株非重复株，包含假单胞菌139株（浅黄假单胞菌2株，荧光假单胞菌2株，栖稻假单胞菌2株，斯氏假单胞菌9株，恶臭假单胞菌10株，铜绿假单胞菌114株），不动杆菌137株（鲍氏不动杆菌67株，洛菲不动杆菌69株，溶血不动杆菌1株），嗜麦芽假单胞菌16株，伯克霍尔德菌属14株（洋葱伯克霍尔德菌14株），金色杆菌属10株（短小金黄杆菌7株，产吲哚金黄杆菌3株），无色杆菌属7株（木糖氧化无色杆菌5株，木糖氧化无色杆菌反硝酸亚种2株）。
2.2细菌体外药敏
对铜绿假单胞菌属有较强体外抗菌活性的为：阿米卡星（97.7%）、亚胺培南（92.3%）；对不动杆菌属（洛菲不动杆菌和鲍氏不动杆菌）有较强体外抗菌活性的是：亚胺培南（96.3%）、美洛培南（93.8%）、妥布霉素（87.8.%）；对伯克霍尔德菌属有较强体外抗菌活性的为：米诺环素（84.6%）、美洛培南（64.2%）；对金色杆菌属有较强体外抗菌活性的为：阿米卡星（100.0%）、头孢哌酮/舒巴坦（100.0%）；对无色杆菌属有较强体外抗菌活性的为：头孢哌酮/舒巴坦（100.0%）、头孢他啶（100.0%）、哌拉西林/他唑巴坦（100.0%）、哌拉西林（100.0%）、亚胺培南（100.0%）；对嗜麦芽窄食单胞菌属有较强体外抗菌活性的为：左旋氧氟沙星（75.0%）、米诺环素（71.4%）。见表1.
3讨论
最近几年越来越多的医院感染患者的致病菌为非发酵革兰阴性菌[1],该菌群的耐药范围较广且其感染率和分离率呈明显的上升趋势。我院对非发酵革兰阴性菌的耐药性作了监测，结果表明，多种普遍使用的抗生素对该种细菌都会产生耐药，且多重耐药现象较多，耐药率呈上升趋势。在临床上，美洛培南和碳青霉烯类抗生素亚胺培南都被普遍应用在重症感染的治疗中，这得益于其对多种类型细菌引起的感染均有效。虽然碳青霉烯可用来治疗鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌引起的感染，成为重症患者抗感染治疗的第一选择，但近年来其耐药性逐渐增加，已经不再是该类细菌病治疗的首选药物，取而代之的是头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦、头孢四代头孢吡肟等一线药物。但氨曲南和喹诺酮类和氨基糖苷类抗菌活性较差。且粘液型铜绿假单胞菌耐受抗生素的穿透，且比较容易定植在患者机体，导致治疗失败，因此，实验室分离到粘液型铜绿假单胞菌，应提示临床联合大环内酯类抗生素（克拉霉素或阿奇霉素）和敏感抗生素联合应用，抑制粘液型铜绿假单胞菌藻酸盐粘液质的合成，减轻细菌对组织细胞的破坏，增强吞噬和杀菌能力，减少炎性因子，从而呈现协同效应[2].
近年发现的非发酵菌中，无色杆菌属和金色杆菌属最为常见，主要分布在水和土壤中，也可生存于呼吸机管道、静脉导管、湿化器等多种环境中，其极易感染免疫力低下患者，最终引发多种感染性疾病，如心内膜炎、脑膜炎、肺炎、菌血症等。木糖氧化无色杆菌比粪产碱杆菌更易引起呼吸系统感染疾病。此外，该菌还可引发中耳炎、腹膜炎、心内膜炎、化脓性胰腺炎、眼部感染、泌尿系统感染、中枢神经系统感染、伤口感染、败血症、菌血症等多种疾病。另外，有30%耀50%的产碱杆菌感染者为产碱杆菌同其它需氧菌一起形成的多种微生物混合感染，例如脆弱类杆菌等厌氧菌及链球菌、假单胞菌、不动杆菌等需氧病原菌都常同产碱杆菌一起引起患者感染。
产碱杆菌属、金色杆菌属及伯克霍尔德菌属同鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌等非发酵菌一样，其耐药机制都较为复杂，许多抗菌药物都会引起其耐药，其中较为严重的耐药菌包括木糖氧化产碱菌、脑膜脓毒性金黄杆菌、洋葱伯克霍尔德菌。洋葱伯克霍尔德菌主要会导致细胞缺失膜孔蛋白而降低膜通透性，少数菌株会诱导产生I类头孢菌素酶，进而造成第三代头孢菌素药物对该类细菌的作用下降。黄杆菌对多种抗生素耐药，是由于细菌的外膜通透性差，可以水解碳青霉烯和其它广谱内酰胺类抗生素。导致对碳青霉烯药物完全耐药。木糖氧化无色杆菌对氨基糖甙类、氨苄西林等耐药，对复方新诺明及第三代头孢菌素等敏感，本组资料与文献报道一致。该菌所致感染在临床表现上无特异性，由于该细菌主要侵犯免疫力低下患者，这类患者出现感染时，要及时进行细菌培养。同时应重视原发病和基础病的治疗。
参考文献：
[1]张斌豪，陈志龙。非发酵菌院内感染及其药敏211例分析[J].医学理论与实践，2010,23（7）：860-861.
[2]梁小英。铜绿假单胞菌常见的耐药机制[J].中国医药指南，2012,6（10）：65-66.
